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多片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

多片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

簡要描述:
多片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)
用途
多個短、長片段無縫克隆。插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一,無需純化,可直接與載體進行重組反應(yīng)。

更新時間:2025-01-13

訪問量:92

廠商性質(zhì):代理商

生產(chǎn)地址:

多片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

1. 產(chǎn)品描述:

信勵致和®多片段無縫克隆試劑盒基于DNA序列同源性進行片段重組,可快速將單個或多個片段定向克隆到任意線性化載體中。本試劑盒含有的2×多片段無縫克隆混合液可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3' 端進行重組連接,最終得到的無缺口閉環(huán)質(zhì)粒可直接轉(zhuǎn)化,完成定向克隆。該試劑盒克服了酶切位點的限制,僅需在插入片段PCR引物5' 端引入線性化載體的末端序列,使得插入片段5' 端和3' 端帶有線性化載體兩端一致的序列(15~25 bp),即可實現(xiàn)插入片段的定向重組。重組反應(yīng)可在恒溫條件下快速進行(50 ℃處理15 min),配合靈活的PCR 產(chǎn)物處理方式和快速轉(zhuǎn)化方法,數(shù)小時內(nèi)即可完成從DNA樣品準備到重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化涂板培養(yǎng)的全部操作。



2. 產(chǎn)品特點:

(1)無需考慮酶切位點,基于序列同源性反應(yīng)15 min即可實現(xiàn)載體與片段的快速重組。

(2)插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一,無需純化,可直接與載體進行重組反應(yīng)。

(3)可以選擇性進行 5 min 快速轉(zhuǎn)化 E.coli 感受態(tài)細胞。

(4)可輕松實現(xiàn) 1~5個片段同時定向構(gòu)建進入載體。


多片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)
使用說明


1. 產(chǎn)品組分:

組分/含量

AB0143

AB0144

2×多片段無縫克隆混合液

250 μL

500 μL

平末端對照混合片段

5 μL

5 μL

pUC19線性化載體(50 ng/uL)

5 μL

5 μL

2. 儲運條件:

-25~-15℃存儲,有效期12個月, 干冰運輸。

3. 注意事項:

(1)片段擴增用模板、引物、線性化載體、高保真聚合酶、感受態(tài)細胞、ddH2O需要自備。

(2)重組產(chǎn)物冰上冷卻后,可直接轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化時重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過所用感受態(tài)細胞體積的1/10。

(3)純化或回收的載體或目的片段品質(zhì)較差會顯著降低克隆陽性率。

(4)菌落少時,建議轉(zhuǎn)化時適當增加重組產(chǎn)物的量,或者增加菌液涂布量。

(5)隨著重組質(zhì)粒長度的增加,克隆效率降低,建議增加引物重疊序列長度或適當延長反應(yīng)時間。




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