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    您的細胞養(yǎng)得好嗎?怎樣才能養(yǎng)好呢?

    發(fā)布時間: 2021-11-29  點擊次數(shù): 1546次

    細胞培養(yǎng)是實驗室里最常見和最基本的實驗了。您的細胞養(yǎng)的好嗎?您對細胞培養(yǎng)體系了解嗎?培養(yǎng)基對細胞培養(yǎng)影響大嗎?……

    細胞培養(yǎng),蘊含著大學問。有時候細胞狀態(tài)不好,轉(zhuǎn)染 、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養(yǎng)的因素很多,讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。



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    培養(yǎng)基

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    細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,是提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的物質(zhì)基礎。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同,英文都是medium。當它是粉劑時,傾向性地稱為培養(yǎng)基,而將粉劑配成液體后,多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。培養(yǎng)基主要包括天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基和無血清細胞培養(yǎng)基等。

    經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種,Invitrogen (GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma、Procell(普諾賽)等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應用*泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。


    培養(yǎng)基種類及介紹(部分)

    MEM

    是由Eagle’s基礎培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的,其中增加了組分的范圍及濃度。

    DMEM

    Dulbecco改良的BEM(DMEM )培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細胞設計的,現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。

    RPMI 1640

    是專為淋巴細胞培養(yǎng) 而設計的,現(xiàn)在已廣泛應用于懸浮細胞的培養(yǎng)。


    MEMα

    含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可廣泛應用于各種細胞類型,包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細胞。

    Ham’s F12

    是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現(xiàn)在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM 等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產(chǎn)物,這種培養(yǎng)基已應用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。

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    以前經(jīng)常聽到有人問,這種細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單。此話怎講?如果這種細胞是購自ATCC或Procell的細胞庫,那很簡單,問供應商就行了。或者找到相關的文獻,作為參考。

    但如果你是著手建立一種全新細胞的培養(yǎng)體系,根本找不到任何參考,那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛。因為沒有一個標準答案。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,首先選MEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細胞培養(yǎng)會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養(yǎng)基來,然后花大約兩周的時間做一個簡單的細胞生長實驗,來選擇其中較為適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的最佳培養(yǎng)條件與文獻報道的不同,就算是同一種培養(yǎng)條件,細胞的生長狀態(tài)也時好時壞,這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性,可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。

    以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基,但配制過程就較為繁瑣,要溶解、調(diào)pH值,過濾,過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差,而且有些實驗室的水質(zhì)并不理想,所以培養(yǎng)的效果會有差異。如果使用液體培養(yǎng)基,這種人為的誤差會減少,因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的,批間差會很小。比干粉培養(yǎng)基貴不了多少,而且還幫你省了過濾器和時間。


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    血清

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    血清含有生長因子可促進細胞的繁殖,含有附著因子可促進細胞的貼壁,同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質(zhì)、脂類及激素的來源。較為常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早,營養(yǎng)物質(zhì)越豐富,所含抗體也越少,因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養(yǎng)。由于瘋牛病的原因,到目前為止,我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區(qū)進口牛血清,因此市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲,或是國產(chǎn)的。安培生物目前有代理ZETA LIFE系列澳洲、南美、法國等地來源的進口胎牛血清。

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    溫馨提示:購買血清請不要盲目看品牌,一定要認真識別是否是正品!


    而血清批次間的差別就是不可避免的,這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等,而且與取血動物的來源關系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時,也要盡量保持與原有的一批血清相似。




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