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    傳代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2021-11-12  點(diǎn)擊次數(shù): 3292次
    材料與儀器

    細(xì)胞
    Hanks 胰蛋白酶 EDTA 培養(yǎng)液
    吸管 培養(yǎng)瓶

    實(shí)驗(yàn)步驟


    一、貼壁細(xì)胞:HeLa細(xì)胞的傳代培養(yǎng)


    1. 選取生長(zhǎng)密度80%左右的HeLa細(xì)胞,在生物安全柜中操作,吸去培養(yǎng)皿中的舊培養(yǎng)基,加入2 mL的D-Hanks溶液,漂洗細(xì)胞以除去殘留的血清。


    2. 吸去培養(yǎng)皿中的D-Hanks溶液,加入2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液,于37℃消化2~3 min(如消化程度不夠,可延長(zhǎng)時(shí)間),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞,當(dāng)大部分細(xì)胞變圓時(shí),輕輕吸去酶消化液(如果有較多細(xì)胞漂起,需要直接加入*培養(yǎng)基來終止胰蛋白酶的消化反應(yīng))。


    3. 加入4 mL*培養(yǎng)基,用移液管反復(fù)吹打細(xì)胞成為細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,1000 rpm離心5 min。


    4. 輕輕吸去上清后用*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,把細(xì)胞懸液一分為二或者一分為三后分別轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中。


    5. 接種好的細(xì)胞,應(yīng)在培養(yǎng)皿上標(biāo)記上細(xì)胞名稱、本次傳代日期和操作人,輕輕搖勻后轉(zhuǎn)移到CO2培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)。


    6. 細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,根據(jù)培養(yǎng)基的顏色及細(xì)胞的生長(zhǎng)密度進(jìn)行相應(yīng)的操作(更換新鮮培養(yǎng)基或者再次傳代處理)。


    二、懸浮細(xì)胞或半貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

      

    懸浮細(xì)胞不貼壁(半貼壁細(xì)胞貼壁不緊),所以不需要借助胰蛋白酶消化,具體過程如下:


    1. 取狀態(tài)良好的細(xì)胞,在生物安全柜中操作,用移液管把細(xì)胞吹打均勻。


    2. 把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,1000 rpm離心5 min。


    3. 輕輕吸去上清后用*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,把細(xì)胞懸液一分為二或者一分為三后分別轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中。


    4. 接種好的細(xì)胞,應(yīng)在培養(yǎng)皿上標(biāo)記上細(xì)胞名稱、本次傳代日期和操作人.輕輕搖勻后轉(zhuǎn)移到CO2培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)。


    5. 細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,根據(jù)培養(yǎng)基的顏色及細(xì)胞的生長(zhǎng)密度進(jìn)行相應(yīng)的操作(更換新鮮培養(yǎng)基或者再次傳代處理)。



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