小伙伴們都知道，實(shí)驗(yàn)室里培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞一般可以簡(jiǎn)單地分為兩大類，貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞（adherent cells）指的是這類生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物表面,只有依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長(zhǎng)，繁殖的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞在該表面生長(zhǎng)后，一般會(huì)形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細(xì)胞或者上皮樣細(xì)胞。而另一類則是細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，這類細(xì)胞我們稱之為懸浮細(xì)胞。懸浮細(xì)胞在顯微鏡下觀察，一般是單個(gè)生長(zhǎng)的大小均一的圓圓的，亮亮的形態(tài)規(guī)則的細(xì)胞形態(tài)，也有部分細(xì)胞聚集，成團(tuán)生長(zhǎng)。

實(shí)際上貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞跟懸浮的細(xì)胞都有很多種。活體體內(nèi)的細(xì)胞當(dāng)離體置于體外培養(yǎng)時(shí)大多數(shù)均以貼壁方式生長(zhǎng)，主要包括一些正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，比如成纖維細(xì)胞，骨骼組織（骨及軟骨），心肌與平滑肌、肝、肺、腎、乳腺皮膚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，內(nèi)分泌細(xì)胞，黑色素細(xì)胞以及各種腫瘤細(xì)胞等。

而少數(shù)細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)則是懸浮生長(zhǎng)，包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是血液白細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞等。今天我們就來(lái)討論討論懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)吧。

從懸浮細(xì)胞的定義上來(lái)說(shuō)，懸浮細(xì)胞是不貼壁的，懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，所以由此可知懸浮細(xì)胞不需要酶的作用就可以使其從培養(yǎng)容器表面脫離，故懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)的方法較為簡(jiǎn)單。一般實(shí)驗(yàn)室中常用直接傳代法和離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下）來(lái)處理懸浮細(xì)胞。當(dāng)小伙伴們觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至 80%～90%（細(xì)胞懸液變黃）的時(shí)候，細(xì)胞就可以進(jìn)行傳代操作了。

從顯微鏡下觀察，如果細(xì)胞狀態(tài)良好（基本無(wú)細(xì)胞碎片，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則）時(shí)，則可以選擇直接傳代法。將原瓶中的培養(yǎng)基按比例（具體比例視實(shí)驗(yàn)而定，但是不能太稀，太稀細(xì)胞長(zhǎng)不起來(lái)）分裝到新的培養(yǎng)瓶中，然后補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基（補(bǔ)加的培養(yǎng)基量不能太打，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因?yàn)槊芏冗^(guò)低而養(yǎng)不起來(lái)），然后隔天觀察細(xì)胞密度來(lái)考慮是否需要補(bǔ)液。

但是當(dāng)從顯微鏡下觀察，細(xì)胞狀態(tài)較差時(shí)（細(xì)胞碎片較多，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則）時(shí)，則需要使用離心傳代法。首先，要將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，1000rpm 離心 5 min；然后棄去上層清液，輕輕地將細(xì)胞沉淀彈散（盡量不用吹打，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好甚至死亡），使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；最后用吸管吸取適量細(xì)胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

好啦，懸浮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)就介紹到這里了，小伙伴們下期再見(jiàn)。